一、材料选择及消毒
1.材料选择
黄精组织培养外植体应在3~ 4月份选择当年生、生长健壮、无病虫害的植株,以其根鉴为繁殖材料。
2.消毒
将所选材料的地下块茎用水刷洗干净,去掉叶片和根系,切下根状茎上的芽,切取顶芽2 ~3cm,用200mg/L羧苄西林钠或头孢唑林钠进行浸泡处理5小时,浸泡时进行振荡(26℃,每分钟112转),取出材料后用无菌水清洗2次,接着用75%乙醇漂洗30秒,无菌水清洗1次,1g/L氧化汞灭菌5分钟, 再用无菌水清洗3次。晾干后切成0.5cm左右大小,然后接种于培养基上。
二、愈伤组织培养和芽分化
将无菌外植体经切分处理后接入MS+NAA 1.5mg/L+ KT 1.5mg/L培养基中约15天后即有启动痕迹;培养25天左右,根茎芽周围开始冒出新芽,但其生长势较弱,有效芽较少;培养35天左右,根茎芽周围有大量新芽冒出,且其生长势有所增强,有效芽逐渐增多;培养45天左右,新生芽的数量达到最大值,且其生长势最强,有效芽的数目趋于稳定;培养55天左右,新生芽的生长趋势开始明显下降,有效芽的数目趋于稳定,芽体有变黄迹象;培养65天后,新生芽体的生长趋势进一步下降,芽体有萎靡现象,出现新生芽体枯死衰退情况。
三、黄精的继代增殖培养
待愈伤组织或不定芽形成后,将分化的不定芽块茎切成0.5cm左右的小块转接至增殖培养基(MS+6-BA4.0mg/L+NAA0.2ng/L)。连续继代增殖培养可达7~8代。其增殖率一般为4~6倍。继代培养的培养时间为45 ~55天为宜。
四、黄精的生根苗培养
将继代增殖培养的组培材料转移至生根培养基( 1/2MS + NAA 1.0mg /L+活性炭0.20g/L)中进行增殖培养,30天后就能长出根。生根率可达90%以上。
以上愈伤组织、芽分化、继代培养和生根苗培养的基础培养基加入了蔗糖20g/L、 琼脂5g/L,pH值5.8~6.8。培养环境温度25℃2℃,光照培养强度为2000~ 30001x,光照时间每天10~ 16小时。
五、炼苗移栽
生根45天后,敞开培养瓶炼苗3天,选择根长大约为2 ~3cm,根数多于3条的芽的植株,洗净培养基后移栽于基质(泥炭土:沙:珍珠岩=2:2:1)中,置18~ 20℃温度下,土壤湿度保持50%~60%,每1~ 2周喷施1次叶面肥,2个月后黄精组培苗成活率可达90%以上。